香蕉枯萎病（Fusarium oxysporum f.sp. cubense, Foc）是破坏香蕉维管束导致植株死亡的毁灭性土传病害，尤其是4号生理小种（Foc race4，Foc4）给香蕉产业和种植者造成巨大经济损失。如何选择快速稳定、操作简便、经济高效的基因编辑方式十分重要，大量前期试验和分析对各种因素进行评估分析至关重要。对于镰刀菌而言，没有曲霉的AMA1自主复制载体无法做到无抗性多循环基因编辑，含有端粒的自主复制载体（pTEL-Fen） 是否能够在Fusarium上成功应用尚未实验验证。因此，排除这两个自主复制载体外，Foc4的基因编辑方法只有质粒型和RNP两种方式选择，但质粒型和RNP两种基因编辑都需要筛选标记，因此，构建一种可重复、高效率且稳定的香蕉枯萎病菌CRISPR/Cas9基因编辑载体，克服以往基因敲除受限于筛选标记的问题，为解析枯萎菌在与寄主香蕉分子互作中致病机制以及后续采用HIGS技术培育抗枯品系提供理论基础和新的靶标选择。
鉴于此，国家香蕉（芒果）产业技术体系病害防控岗位科研团队近期通过了“一种香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑载体、制备方法及应用”的国家发明专利申请，该专利构建的编辑载体包括Cas9和sgRNA表达框；Cas9表达框中，包括PgpdA启动子、优化密码子Foc4-Cas9和密码子Foc4-Cas9两端携带的H2BNLS核定位信号；sgRNA表达框中，包括Pol III型5SrRNA启动子和gRNA序列N20；专利构建的香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑载体，实现了香蕉枯萎病菌Foc4的更高编辑效率的体内表达Cas9和sgRNA的质粒型CRISPR/Cas9基因编辑技术，操作简便且稳定，充分提高香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑效率。
镰刀菌RISPR/Cas9基因编辑技术的成熟将为后续香蕉枯萎病菌的功能分析提供有力的反向遗传学工具，为后续研究枯萎病与寄主之间的分子互作提供强有力的技术支撑。
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